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第三版《指南》要求，新冠肺炎疫情發生后，所在的設區市，包括城區常住人口1000萬以上的超大城市，應當在24小時內完成劃定范圍的區域核酸檢測任務。需要時，可通過區域內協同支援予以保障；必要時，可申請全國支援。
第三版《指南》強調精準劃定檢測范圍，將第二版《指南》中的“全員”修改為“區域”，區域大小由疫情防控需要決定。為適應奧密克戎等新冠病毒變異株傳播速度快的特點，規定了劃定范圍的核酸檢測應當在24小時內完成，進一步提高疫情“早發現”能力。為便于地方測算、準備檢測力量，在充分總結西安、天津等地經驗基礎上，第三版《指南》對各地在24小時內完成核酸檢測所需的采樣人員數、核酸檢測能力給出了明確測算指導。
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